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背景
对于癌症患者来说，治疗领域正在迅速变化和发展，涌现出尖端技术和充满希望的抗击疾病的新方法。然而，正如所有旅程都必须迈出第一步，癌症治疗的康复之路也同样如此，而这第一步传统上需要苏木精和伊红 (H&E) 染色。术中冷冻切片会诊是 H&E 染色常用的一种方式，即从冷冻组织块制备切片。H&E 染色过程非常快速，通常可在 30-60 分钟内得出结果。
然而，这种方法存在一些问题，尤其是冷冻过程会破坏组织形态，导致结果难以解读。不幸的是，这些困难常常导致误诊，需要进一步检查，甚至需要患者再次接受手术——这个过程会耗费所有相关人员的时间、金钱和精神压力。
免疫组织化学 (IHC) 染色提供了一种解决方案，与 H&E 染色相比，它能提升操作者的信心，因为 IHC 染色除了显示组织的整体形态外，还能显示生物标志物的表达。然而，IHC 染色一直以来的缺点是耗时较长，可能需要数小时才能完成。由于 IHC 染色的周转率较高，尽管其优势显著，但术中阶段通常不会使用，而仅限于术后诊断，处理和解读结果可能需要 1-2 天。在此期间，外科医生可能需要在不确定具体情况的情况下决定如何进行手术。
但如果速度不再是关键因素呢？Celnovte Biotechnology 的 PolyStacker TM检测技术可确保在可接受的时间内获得结果，周转时间短至 10-15 分钟，从而辅助诊断癌症——所有操作均可在术中完成。这种快速的 IHC 方案与 H&E 染色同时使用，可全面了解组织样本的性质，从而协助外科医生制定后续操作方案。
该技术有望快速检测肿瘤标志物，降低假阴性率，提高疑难病例（转移性微病变、浸润性微病变）的诊断准确性，并实现与术后传统FFPE IHC结果相当的匹配率。借助该技术，患者和外科医生都能更有信心地做出手术决策，减轻压力，从而在选择下一步治疗方案时做出更明智的决定，并节省宝贵的抗癌时间。
案例研究
Celnovte Biotechnology 冰冻切片快速免疫组化 (IHC) 技术的有效性，可以通过以下案例来观察。本案例中，中国医生列举了一个使用快速免疫组化 (IHC) 治疗肺癌的案例。患者为一名 67 岁女性，因 CT 扫描发现结节，且抗炎治疗无效而入院并接受手术治疗。
图1 病例1患者CT扫描，双侧胸廓对称，未见明显异常。气管居中，气管支气管树通畅。右肺下叶可见一实性结节（薄层lm373），长径约11.3mm。双肺可见少数微结节。双侧肺门结构清晰，形态、大小、位置未见明显异常。各组纵隔淋巴结均未见异常肿大。
冷冻切片诊断用于确定结节的性质，以确定观察到的生长物的恶性程度。患者接受了右下叶部分肺组织切除术，切除的组织被送去冷冻，并用于H&E和快速免疫组化（IHC）组织检测。
H&E可见大量淋巴细胞，但未发现明显恶性病变。
图2 右下肺组织切片H&E染色，尺寸为120x40x15mm。切片中可见淋巴组织增生，常规H&E染色未见明显恶性病变。
由于冰冻切片应用了快速IHC，CK染色可见切片中可见小灶性上皮细胞簇，考虑为上皮性恶性肿瘤。
图3 – 右下肺组织切片经Celnovte Biotechnology冰冻切片快速IHC染色，尺寸为120x40x15mm。CK染色后，切片中可见小的局灶性上皮细胞簇，诊断为上皮性恶性肿瘤。
结合H&E染色结果，外科医生能够在术中继续进行假设，即组织为淋巴上皮癌阳性。如果仅使用H&E染色，他们在手术室中将无法做出这一假设。进一步的FFPE IHC检测（CK、P40和原位杂交EBER），以及未发现鼻咽肿瘤，证实了这一假设，并诊断患者患有淋巴上皮癌。
在本例中，Celnovte Biotechnology 的冰冻切片快速免疫组化 (IHC) 技术被用于显示难以观察到的淋巴上皮癌细胞。由于所选淋巴细胞数量巨大，这些鳞状/未分化细胞尤其难以观察，因为它们可能被数量稀少且体积小的细胞簇所掩盖。由于使用了快速免疫组化技术，诊断得以准确，否则这些肿瘤细胞很容易被误诊，尽管它们处于生长早期，病变不太明显。
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案例分享丨CELNOVTE术中快速免疫组化在支气管腺瘤及肺腺癌诊断中的应用
肺细支气管腺瘤（BA）患者通常无明显临床症状，几乎所有诊断均通过CT扫描图像首次发现。但由于BA影像学表现与早期恶性肿瘤难以鉴别，因此术中冰冻切片病理诊断是必要的步骤[1]。
由于近端BA的外周肺组织常富含黏液细胞，需与浸润性黏液腺癌相鉴别。远端BA管腔细胞缺乏黏液及纤毛细胞，甚至仅有Clara细胞或肺泡细胞，易与非黏液原位腺癌、微浸润性腺癌，甚至浸润性腺癌混淆。由于冰冻切片上细胞纤毛结构不清，间质增宽，难以判断有无基底细胞，易与浸润性黏液腺癌及高分化腺泡腺癌混淆，导致误诊[2-3]。
免疫组化检查连续性基底细胞的存在是诊断的重要依据。术中快速免疫组化检测CK5/6等抗体可辅助鉴别诊断。
临床信息：
患者，女性，65岁，冰冻切片（左肺下叶结节）示一灰白色结节，直径1cm。
01 术中H&E染色：
对于肺组织内支气管周围边界清楚的病变，可见柱状/立方形上皮以腺样、乳头状或贴壁形式生长，需与浸润性癌和支气管腺瘤相鉴别。
02 术中快速免疫组织化学
术中对冷冻切片进行 CK5/6 (-) 快速免疫组织化学检查，结果显示没有基底细胞，与侵袭性腺癌一致。
03 术后H&E染色
术后石蜡H&E染色结果与术中染色结果一致。
04 术后免疫组织化学
石蜡切片免疫组织化学检测p40-、TTF-1+、Napsin A(+)。
p40阴性
TTF-1阳性
Napsin A阳性
诊断结果：
根据组织形态学和免疫组织化学的最终诊断：侵袭性腺癌，非黏液型，中分化。
更多内容——基于统计学的术中快速免疫组化 (IHC) 疗效证据
目前，术中冰冻切片H&E染色技术是手术中快速判断标本病变性质、指导手术方式及范围的重要手段，但部分疾病的组织细胞形态较为相似，单纯依靠H&E染色难以鉴别，容易漏诊或误诊，甚至造成患者的二次手术或医疗事故。
韩立元等[4]对术中冰冻切片与术后石蜡切片的病理诊断结果及免疫组化病理诊断结果进行了对比分析，发现术中冰冻切片病理检查对良、恶性肺结节的鉴别诊断准确率为99.2%，对肺恶性肿瘤的分类准确率为85.3%。
沈元龙等[5]以石蜡切片免疫组化确诊的肺硬化性肺炎(PSP)和肺腺癌组织为研究对象，通过比较TTF-1、ER及Ki-67的表达情况发现，术中快速免疫组化与术中H&E染色对PSP的诊断准确率分别为100.00%和58.33%，对肺腺癌的诊断准确率分别为96.15%和76.92%(表1)。这表明，术中快速冰冻切片免疫组化可以显著提高PSP和肺腺癌的诊断准确率。进一步通过比较两种疾病中TTF-1、ER及Ki-67的差异表达结果，发现其可作为术中快速冰冻切片免疫组化鉴别诊断两种疾病的指标。
表1 – 术中冰冻切片快速免疫组化与H&E染色对PSP和肺腺癌诊断准确性的比较
注：* P<0.05，Fisher精确检验
此外，术中冰冻切片快速免疫组化染色结果与石蜡切片免疫组化染色结果对比，结果显示两者无明显差异，证实了术中冰冻切片快速免疫组化染色对于PSP与肺腺癌的鉴别诊断具有实际的临床意义。
术中冰冻切片快速免疫组化检测与术中冰冻切片H&E染色同步进行，病理科收到标本后30分钟内即可出具报告，不影响冰冻诊断的报告时间。同时，术中快速冰冻切片免疫组化检测不仅能提高诊断的准确性，还能显著缩短患者的病理等待时间，为调整手术方案提供可靠依据。
参考：
[1] 王英霞;田阳;赵文;张宣. 24例细支气管腺瘤临床病理分析.临床与病理研究杂志.2023,43(05):880-887.
[2] Liu S, Liu N, Xiao M, Wang L, Wang EH. 首例纯黏液性腔细胞内衬细支气管腺瘤的分子分析：病例报告。《医学》（巴尔的摩）。2020年9月25日;99(39):e22322。
[3] 朱浩浩;任光宇;温剑锋. 术中冰冻切片检查中易误诊的几种肺部良性疾病. 诊断病理学杂志. 2023,30(07):701-703, 707.
[4] 韩丽媛;崔雅燕;陈冬;梅少帅;连国良. 肺结节冰冻手术病理诊断研究. 心血管与肺部疾病杂志. 2022,41(03):302-305, 308.
[5] 沈元龙;李琳;吴子豪. 术中冰冻切片快速免疫组化与HE染色在硬化性肺肿瘤及肺腺癌诊断中的应用比较. 安徽医学. 2019,40(12):1392-1395.
